在灭菌程序验证中，尽管可通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但指示剂的被灭杀程度，则是评价一个灭菌程序有效性较直观的的指标。可使用市售的标准指示剂，也可使用有日常生产污染菌监控中分离的耐受性较强的微生物制备的孢子。在指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的D值，并测定孢子的纯度和数量。验证时，指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。在较终灭菌法中，指示剂应放在灭菌柜的不同部位。并避免指示剂直接接触到被灭菌物品。指示剂按设定的条件灭菌后取出，分别置培养基中培养，确定指示剂中的孢子是否被*杀灭。

　　过度杀灭产品灭菌验证一般不考虑微生物污染水平，可采用市售的指示剂。对灭菌手段耐受性差的产品，设计灭菌程序时，根据经验预计在该生产工艺中产品微生物污染的水平，选择指示剂的菌种和孢子数量。这类产品的无菌保证应通过监控每批灭菌前的微生物污染的数量、耐受性和灭菌程序验证所获得的数据进行评估。

　　在医疗机构的灭菌生物监测中，WS310国家标准已明确规定:

　　1、压力蒸汽灭菌过程为每周一次，使用压力蒸汽灭菌指示剂;

　　2、环氧乙烷气体灭菌为每批次都要监测，使用环氧乙烷灭菌指示剂;

　　3、低温等离子体灭菌为每日监测一次，使用低温等离子体灭菌指示剂。

　　以上三种灭菌方式，也是2012年医疗机构的主要灭菌方式，其中，压力蒸汽灭菌使用较为广泛。